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熒光PCR之探針法

更新時間:2020-07-29      點擊次數:5047

熒光PCR的探針法分為全基因組核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針、cDNA探針、RNA探針的特點。寡核苷酸探針特異性較高,區別染色體上一個堿基的突變;由于其鏈短分子量小,雜交時間較短僅需1-2小時),可預測雜交條件可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無需分子克隆,獲得探針相對容易。但是由于其鏈短致使標記率較低,也影響了檢測的敏感性,僅能檢出含很少的標本。cDNA探針RNA為模板,用反轉錄酶合成單鏈cDNA探針。主要用來分離cDNA文庫中相應的基因。RNA探針一般是單鏈,具有單鏈DNA探針的優點,又具有RNA:DNA雜交體比DNA:DNA雜交體有更高的穩定性,所以在雜交反應中RNA探針比相同活性的DNA探針所產生信號要強。熒光定量PCR類產品的組成方式通常為:1管反應緩沖液+1管酶的形式。其中反應緩沖液包含熒光PCR反應緩沖系統、引物、探針、dNTP;酶包含Taq酶、UNG酶。這種形式的產品使用方法復雜,必須先將反應緩沖液和酶按照比例混合均勻后,分裝至PCR擴增管中,然后再加入樣本。由于酶的用量通常較少(≤0.5μL)、酶液較粘稠,且配制過程繁瑣,配制誤差較大、反應重復性不好。熒光PCR凍干的試劑凍干機Pilot5-8T技術要點:

  1. 完整的PAT控制技術,可對凍干過程進行完整的控制和分析監控。包括預凍全過程控制、預凍結束判定、升華全過程控制、升華結束判定、解析全過程控制及凍干結束判定。
  2. 板層溫度均一度±1℃。
  3. 系統極限真空度±1Pa。
  4. 系統真空泄露率<3Pa.L/S
  5. 外界干擾熱量屏蔽。
  6. 共晶點測試儀助力工藝開發。

      7.全進口配件

 

 

 

 

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